Konference: 2009 XXXIII. Brněnské onkologické dny a XXIII. Konference pro sestry a laboranty
Kategorie: Zhoubné gynekologické nádory
Téma: I. Experimentální onkologie
Číslo abstraktu: 023p
Autoři: Mgr. Pavla Hublarová; Doc. Mgr. Roman Hrstka, Ph.D.; MUDr. Pavla Rotterová; MUDr. Leopold Rotter; MUDr. Marie Čoupková; Vinay Badal; MUDr. Rudolf Nenutil, CSc.; RNDr. Bořivoj Vojtěšek, DrSc.
Infekce lidskými papillomaviry (HPV) představuje
nejrizikovější faktor pro vznik a vývoj intraepiteliálních lézí
děložního hrdla (CIN) a cervikálního karcinomu. Nejčastějším kmenem
je HPV16, jehož proteiny rané fáze exprese E6 a E7 jsou v kooperaci
schopné transformovat buňky funkčním vyřazením dvou
nejdůležitějších antionkogenů – p53 a pRb. E6 degraduje p53 za
pomoci ubikvitin-ligázy E6-AP, E7 podporuje fosforylaci pRb, čímž
umožní transkripčnímu faktoru E2F spustit expresi proteinů
zodpovědných za přechod buňky do S-fáze. Vzhledem k vysokému počtu
infikovaných a nízkému počtu karcinomů se předpokládá existence
epigenetického mechanismu kontroly vývoje CIN a karcinomu pomocí
metylací CpG ostrůvků v promotoru a genu E6. Cílem naší práce byla
analýza výskytu metylace v prekancerózních stádiích karcinomu
děložního hrdla a následné stanovení úlohy metylací v buněčné
transformaci a progresi onemocnění.
Infekce HPV16 byla detekována pomocí PCR. Určení metylace v promotoru a genu E6 bylo stanoveno restrikčním štěpením metylačně specifickou endonukleázou McrBC s následnou PCR amplifikací. Exprese genu E6 byla určena kvantitativní PCR v reálném čase.
Analyzovali jsme 103 kartáčkových stěrů z děložního hrdla žen bez cytologických a kolposkopických abnormalit, pozitivita HPV16 byla 20,4%. Incidence HPV16 u pacientek s CIN I byla 44,4% (n=18), s CIN II/III 62,2% (n=143) a s karcinomem 74,2% (n=31). Přítomnost HPV16 u všech typů lézí ve srovnání se skupinou zdravých žen byla statisticky signifikantní (P<0,001; Pearson’s chi-square test). Metylace genu E6 byla detekována v 81% u HPV16 pozitivních zdravých žen (n=21) ve srovnání s 62,5% zastoupením metylace u CIN I (n=8), 31,5% u CIN II/III (n=89) a 43,4% u karcinomů (n=23). Byla nalezena statistická významnost v porovnání lézí a zdravých žen (P<0;001; Pearson’s chi-square test). Exprese genu E6 zjištěná pomocí stanovení hladiny mRNA významně korelovala se stavem metylace (P=0,010; Mann-Whitney U test). Z našich výsledků vyplývá, že metylace promotoru a genu E6 HPV16 představuje biomarker progrese onemocnění děložního hrdla použitelný v klinické praxi.
Infekce HPV16 byla detekována pomocí PCR. Určení metylace v promotoru a genu E6 bylo stanoveno restrikčním štěpením metylačně specifickou endonukleázou McrBC s následnou PCR amplifikací. Exprese genu E6 byla určena kvantitativní PCR v reálném čase.
Analyzovali jsme 103 kartáčkových stěrů z děložního hrdla žen bez cytologických a kolposkopických abnormalit, pozitivita HPV16 byla 20,4%. Incidence HPV16 u pacientek s CIN I byla 44,4% (n=18), s CIN II/III 62,2% (n=143) a s karcinomem 74,2% (n=31). Přítomnost HPV16 u všech typů lézí ve srovnání se skupinou zdravých žen byla statisticky signifikantní (P<0,001; Pearson’s chi-square test). Metylace genu E6 byla detekována v 81% u HPV16 pozitivních zdravých žen (n=21) ve srovnání s 62,5% zastoupením metylace u CIN I (n=8), 31,5% u CIN II/III (n=89) a 43,4% u karcinomů (n=23). Byla nalezena statistická významnost v porovnání lézí a zdravých žen (P<0;001; Pearson’s chi-square test). Exprese genu E6 zjištěná pomocí stanovení hladiny mRNA významně korelovala se stavem metylace (P=0,010; Mann-Whitney U test). Z našich výsledků vyplývá, že metylace promotoru a genu E6 HPV16 představuje biomarker progrese onemocnění děložního hrdla použitelný v klinické praxi.
Tato práce byla podporována granty MZ0MOU2005, IGA MZČR
NS/9812-4 a MŠMT LC06035.
Datum přednesení příspěvku: 16. 4. 2009
